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8.3: Cortar y pegar ADN - Digests de restricción y ligadura de ADN - Biología

8.3: Cortar y pegar ADN - Digests de restricción y ligadura de ADN - Biología


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Enzimas de restricción

Muchas bacterias tienen enzimas que reconocen secuencias de ADN específicas (generalmente 4 o 6 nucleótidos) y luego cortan la hélice de ADN de doble hebra en esta secuencia (Figura ( PageIndex {7} )). Estas enzimas se denominan específicas de sitio. endonucleasas de restricción, o más simplemente "enzimas de restricción”, Y funcionan naturalmente como parte de las defensas bacterianas contra virus y otras fuentes de ADN extraño. Para cortar el ADN en lugares conocidos, los investigadores utilizan enzimas de restricción que han sido purificadas de varias especies bacterianas y que pueden adquirirse de diversas fuentes comerciales. Estas enzimas generalmente reciben el nombre de la bacteria de la que se aislaron por primera vez. Por ejemplo, EcoRI y EcoRV son ambas enzimas de E. coli. EcoRI corta el ADN de doble hebra en la secuencia GAATTC, pero tenga en cuenta que esta enzima, como muchas otras, no corta exactamente la mitad de la secuencia de restricción (Figura ( PageIndex {8} )). Los extremos de una molécula cortados por EcoRI tienen una región sobresaliente de ADN monocatenario, por lo que a veces se les llama extremos pegajosos. Por otra parte, EcoRV es un ejemplo de una enzima que corta ambas hebras exactamente en la mitad de su secuencia de reconocimiento, produciendo lo que se llama extremos romos, que carecen de voladizos.

Ligadura de ADN

El proceso de ADN ligadura ocurre cuando las hebras de ADN se unen covalentemente, de un extremo a otro a través de la acción de una enzima llamada ADN ligasa. Se dice que las moléculas de extremos pegajosos con secuencias colgantes complementarias tienen extremos compatibles, que facilitan su unión para formar ADN recombinante. Asimismo, dos secuencias de extremos romos también se consideran compatibles para unirse, aunque no se ligan entre sí de manera tan eficiente como los extremos pegajosos. Nota: las moléculas de extremos pegajosos con secuencias no complementarias no se unirán con la ADN ligasa. Por tanto, la ligación es fundamental para la producción de ADN recombinante, incluida la inserción de un fragmento de ADN de doble hebra en un vector plasmídico.


Ver el vídeo: Reparación directa adn (Julio 2022).


Comentarios:

  1. Moogulkree

    Esperar ...

  2. Shaktishakar

    Es una pena que no pueda hablar ahora, llego tarde a la reunión. Seré liberado, definitivamente expresaré mi opinión.

  3. Cynn

    tienes razón, es cierto

  4. Nikogrel

    Estas equivocado. Estoy seguro. Puedo probarlo. Escríbeme en PM.

  5. Shad

    Considero, que estás equivocado.

  6. Westbroc

    Los felicito, esta excelente idea es necesaria solo por cierto

  7. Jered

    Gran respuesta, felicitaciones

  8. Grotilar

    Pido disculpas, no se acerca a mí. ¿Quién más puede decir qué?



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